物品和用品的彻底消毒与灭菌

在细胞培养领域，所有使用的器具和用品需要进行全面清洗和消毒，各种溶液也要仔细灭菌。在进行取样后的检菌确认无菌状态后，才能正式使用。此外，进行无菌过滤操作时，随着过滤体积的增加，滤膜破损的风险上升，因此应选择最后过滤的液体进行检测。定期对二氧化碳培养箱进行消毒操作非常重要。具体步骤为：用75%的酒精擦拭培养箱后，使用可移动的紫外灯照射至少30分钟，并在培养箱的水槽中加入经过高压灭菌的超纯水以保持湿度。此外，还可以配制300ml的饱和硫酸铜溶液与3L灭菌超纯水混合后，放入水槽以增强灭菌效果。

抗生素的合理使用

不同类型的抗生素具有不同的作用机制，联合使用通常比单独使用效果更好，而预防性使用优于污染后处理。然而，长期反复使用抗生素可能导致微生物产生耐药性，同时对细胞产生负面影响。因此，为了降低抗药细菌的诱导风险，应定期更换培养系统中的抗生素，尽可能避免在培养过程中使用抗生素处理。

操作人员的卫生与安全

(1) 进入无菌室之前，操作人员应彻底洗手，并按照规定穿戴隔离衣。在操作前，应使用75%酒精的棉球擦拭手部、瓶口以及烧灼瓶口。

(2) 操作时动作要轻柔，吸管帽的安装、瓶口的开启或封闭等操作应在火焰附近进行烧灼处理。但需注意，金属器械不得在火焰中长时间加热，以防退火；烧灼过的器械在冷却后才能使用。吸取过培养液的吸管应弃用，避免因残留物质带来的潜在污染风险；胶塞、橡皮乳头和塑料培养用品的烧灼时间也需控制，以免产生有毒气体，影响细胞培养。

(3) 在操作过程中应尽量减少交谈，避免唾液和呼气引起的污染。

(4) 使用培养液时，不应过早开瓶，开瓶后的液体应保持倾斜状态以防止细菌结晶污染，未使用的培养液应立即封闭瓶口，避免细胞在处理前长时间暴露于空气中。

(5) 操作结束后应整理工作台面，并用浸泡消毒水的布料擦拭干净。

(6) 吸取培养液或细胞悬液时应专管专用，一旦吸管与手或其他污染物接触应立即丢弃，以防止污染扩散或交叉污染。

防止细胞交叉污染

所有细胞系，无论是外购的还是自建的，应当提前留存足够的冷冻样本，万一发生交叉污染，可通过细胞的遗传学方法鉴定。若发现遗传物质发生改变，应复苏早期打造的细胞使用。重要细胞系的传代工作应由两人独立进行以确保安全。

无菌室的彻底消毒

(1) 使用新洁尔灭对无菌室进行全面擦洗。使用时需稀释并立即使用。相较于酒精，新洁尔灭的主要优点在于价格低廉，500ml仅需5元，并且可稀释50倍使用。

(2) 甲醛熏蒸法是一种有效的消毒方法，其水溶液和气体对多种微生物有杀灭作用。甲醛价格便宜，并且在熏蒸消毒过程中不会损坏衣物和家具。其主要用法为：熏蒸消毒时，每立方米空间需用10~15毫升甲醛. 在密闭环境下至少保持4小时。可将高锰酸钾与40%甲醛（1:1）混合使用，产生白色气雾。消毒结束后可通过25%醋水中和刺激气味。甲醛气体的毒性极大，操作时务必佩戴防毒面具。