大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞FLS

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：第一次建议1:2传代；传代情况：每2天更换培养液。
备注：用无菌离心管收集培养基以作对比培养，若效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，待其状态良好后，加入完全培养液并封好瓶口，以确保最佳运输效果。使用75%酒精喷洒细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱静置3-4小时，稳定细胞状态后进行处理。使用显微镜观察细胞生长状态，并在不同倍数下拍照保存（建议拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若不提供照片，默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若未超过80%汇合度，收集完全培养液至离心管中，保留5ml，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。若细胞密度超80%，可进行传代，步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃孵育1-2分钟，显微镜下观察。若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落并吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2 ml完全培养基中。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置观察，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落。转移悬液至15ml离心管中，1000rpm离心5min。
3. 弃去上清液，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀并加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如后期需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上后转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于37℃水浴解冻至无冰晶，外壁用75%酒精擦拭。
2. 将冻存管内细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基，并接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会发生脱落，这属于正常现象。若脱落较多，可按如下方式处理：将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作对比培养，沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再离心后，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发情况包括：
- 运输中遇到问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等）。
- 收到后48小时内提供真实实验结果的污染。
- 在规定时间内未存活的细胞（需提供照片）。
若技术人员判定为我方责任，重发。

2）不予重发的情况包括：
- 客户自身造成的污染。
- 客户错误操作引起的细胞状态恶化。
- 不符合建议的培养体系造成细胞问题。
- 不提供细胞培养前三天照片。
- 收到后不及时反馈的问题。
视具体情况而定。

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